DIAGNÓSTICO POR PRUEBAS DE ELISA II

En los ensayos inmunológicos son procedimientos en los cuales se utilzan anticuerpos como reactivos específicos contra antígenos. 

En el método del ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) se utiliza una enzima (como indica su propio nombre) como marcador para poder observar si se produce la formación del complejo unión antígeno-anticuerpo. Existen variaciones del método para detectar y cuantificar ligandos de alto peso molecular (mayores de 30.000 daltons). La enzima que se emplea puede añadirse a un antígeno para detectar el complejo o al propio anticuerpo si es el antígeno lo que se pretende detectar. 

Casi todas las pruebas ELISA son ensayos en fas sólida en los cuales se absorbe el complejo sobre un soporte sólido (por ejemplo, en una placa). La prueba ELISA se basa en varias teorías:

1. El antígeno y anticuerpo pueden enlazarse a una superficie portadora insoluble y retener su reactividad inmunológica.
2. Las enzimas tienen actividad específica alta y convierten una cantidad relativamente grande de sustrato en producto detectable, lo que permite detectar concentraciones muy bajas de ligando.
3. La actividad enzimática o reactividad inmunológica de los conjugados se preserva y permanece estable durante el análisis y el almacenamiento.
4. Las enzimas no están presentes en el líquido biológico que se va a analizar.

Los anticuerpos utilizados pueden ser de origen monoclonal o policlonal.

Los antígenos se purifican o se producen con tecnología recombiannte, y al igual que los anticuerpos se utilizan como conjugados marcados o enzimáticos y son inmóviles o solubles, dependiendo del protocolo del análisis.

Ensayos de enlace competitivo:

Los ELISA en fase sólida, no competitivos se utilzan para determinar antígenos, haptenos o anticuerpos. Aquí el ligando no marcado compite con un ligando conjugado con el enzima por un número limitado de sitios de enlace con el anticuerpo movilizado y siguiendo el protocolo se retira el ligando no rectante, para así poder relacionar inversamente la cantidad de producto que se forma con la concentración del ligando no marcado con la muestra problema.

Ensayos de enlace no competitivo:

También denominados técnicas del emparedado y son los métodos más utilizados para determinar antígenos que por lo menos tienen dos determinantes antigénicos. Como fase sólida pueden ser utilizadas perlas de poliestireno en donde se absorbe un exceso de anticuerpos generalmente monoclonales, y se sigue el protocolo de trabajo retirando también como en los casos anteriores el exceso de antígeno presente no unido.

Este método ELISA (que cuenta con más variantes que las dos mencionadas) se utilza para detectar múltiples patologías y problemas de salud, entre los que se encuentran la detección de algunos parásitos ya mencionados en las anteriores en este blog.

Ejemplos de tipos de ELISA

Puede encontrar pinchando aquí información más detallada sobre como se realiza este método.